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生物素-C5-馬來酰亞胺標(biāo)記蛋白的具體步驟是什么?

2024-08-04 [97]

生物素-馬來酰胺和生物素-二硫吡啶等,用于在巰基上特異性地標(biāo)記生物素抗體和其他生物分子。

基本信息

中文名稱:生物素-C5-馬來酰亞胺

英文名稱:Biotin-C5-Mal

檢測圖譜:1小時核磁共振

外觀:淺黃色或白色固體

分子式:C14H19N3O3S

分子量:309.38

儲存條件:-20

狀態(tài):固體/粉末

結(jié)構(gòu)式:

生物素-C5-馬來酰亞胺標(biāo)記蛋白的具體步驟是什么?

以下是使用生物素-C5-馬來酰亞胺標(biāo)記蛋白的一般步驟:


準(zhǔn)備工作:


  1. 確保實驗環(huán)境清潔,準(zhǔn)備所需的試劑和器材,如生物素-C5-馬來酰亞胺、待標(biāo)記的蛋白質(zhì)溶液、適當(dāng)?shù)木彌_液(如磷酸鹽緩沖液 PBS)、透析袋或脫鹽柱等。


標(biāo)記反應(yīng):


  1. 將待標(biāo)記的蛋白質(zhì)溶解在合適的緩沖液中,調(diào)整蛋白質(zhì)濃度至適當(dāng)范圍。

  2. 按照一定的比例(通常根據(jù)蛋白質(zhì)的濃度和生物素-C5-馬來酰亞胺的活性來確定),將生物素-C5-馬來酰亞胺加入到蛋白質(zhì)溶液中。

  3. 在適當(dāng)?shù)臏囟龋ɡ缡覝鼗?4°C)下,緩慢攪拌或輕輕振蕩反應(yīng)混合物,使標(biāo)記反應(yīng)進(jìn)行一定的時間(反應(yīng)時間可能因?qū)嶒灄l件和蛋白質(zhì)的特性而異,通常為數(shù)小時)。


去除未反應(yīng)的試劑:


  1. 可以使用透析袋在適當(dāng)?shù)木彌_液中進(jìn)行透析,以去除未反應(yīng)的生物素-C5-馬來酰亞胺和其他小分子雜質(zhì)。

  2. 或者使用脫鹽柱來分離蛋白質(zhì)和未反應(yīng)的試劑。


檢測和驗證標(biāo)記效果:


  1. 可以通過一些方法來檢測標(biāo)記是否成功,如使用生物素檢測試劑盒、熒光檢測(如果生物素-C5-馬來酰亞胺帶有熒光基團(tuán))等。


需要注意的是,具體的實驗步驟可能需要根據(jù)您所使用的蛋白質(zhì)的性質(zhì)、實驗?zāi)康囊约皩嶒灄l件進(jìn)行適當(dāng)?shù)膬?yōu)化和調(diào)整。例如,對于某些容易失活的蛋白質(zhì),可能需要在低溫和更溫和的條件下進(jìn)行標(biāo)記反應(yīng)。

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