如何確定熒光染料的激發(fā)波長(zhǎng)/發(fā)射波長(zhǎng)？

熒光光譜分為：激發(fā)光譜（PLE）和發(fā)射光譜（PL）。

激發(fā)光譜：固定發(fā)射光的波長(zhǎng)，改變激發(fā)光的波長(zhǎng)，記錄熒光強(qiáng)度隨激發(fā)波長(zhǎng)的變化。發(fā)射光譜：固定激發(fā)光的波長(zhǎng)，記錄不同發(fā)射波長(zhǎng)處熒光強(qiáng)度隨發(fā)射波長(zhǎng)的變化。

無(wú)論是激發(fā)還是發(fā)射熒光光譜圖，其都是記錄發(fā)射熒光強(qiáng)度隨波長(zhǎng)的變化。所以熒光光譜中縱坐標(biāo)為強(qiáng)度，橫坐標(biāo)為波長(zhǎng)。首先從圖中能獲取峰位和半峰寬。峰位的直觀體現(xiàn)是熒光的顏色；半峰寬則表示熒光的純度。

因此可以根據(jù)這種熒光素的激發(fā)譜線來(lái)確定其激發(fā)波長(zhǎng)，根據(jù)其發(fā)射譜來(lái)確定其發(fā)射波長(zhǎng)。

激發(fā)譜：不同波長(zhǎng)的光激發(fā)熒光素后，熒光強(qiáng)度的變化。

發(fā)射譜：同一波長(zhǎng)的光激發(fā)熒光素后，各波長(zhǎng)下的熒光強(qiáng)度的變化。

一般都取峰值。

其發(fā)射波長(zhǎng)會(huì)隨激發(fā)波長(zhǎng)變嗎？

對(duì)不同材料來(lái)說(shuō)不同，絕大多數(shù)情況下，發(fā)射波長(zhǎng)會(huì)隨著激發(fā)波長(zhǎng)的偏移而有所偏移。 對(duì)于固態(tài)物質(zhì)，主要是因?yàn)榉肿优c其它材料形成了π建，對(duì)于量子點(diǎn)溶液，激發(fā)波長(zhǎng)也會(huì)顯著導(dǎo)致發(fā)射光譜的不同。 但是不是絕對(duì)的，比如對(duì)于Alex555分子，發(fā)射波長(zhǎng)的偏移往往就相對(duì)較小，這是由于分子內(nèi)部的能帶結(jié)構(gòu)所決定的。

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Cy3-NHS; Cy3 NHS Ester  146368-16-3

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Cy5-NHS;Cy5 NHS Ester  146368-14-1

Cy5-alkyne 1345823-20-2

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Cy7-NHS; Cy7 NHS Ester  477908-53-5

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