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HRP-SH|巰基修飾的辣根過氧化物酶的描述

2025-02-24 [74]

巰基修飾的辣根過氧化物酶(HRP-SH)是一種經(jīng)過化學修飾的辣根過氧化物酶,其分子中引入了巰基(-SH)。以下是其詳細介紹:

結(jié)構(gòu)特點

辣根過氧化物酶是一種含四個二硫鍵的單鏈多肽,由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結(jié)合而成的糖蛋白,含18%碳水化合物。巰基通過與HRP分子中的特定基團反應(yīng)而結(jié)合,形成HRP-SH復(fù)合物。

制備方法

  • 化學修飾法:通過特定的化學試劑與辣根過氧化物酶反應(yīng),引入巰基。例如,使用2-亞氨基硫烷鹽酸鹽與辣根過氧化物酶在適當?shù)木彌_液中反應(yīng),生成巰基修飾的HRP。

  • 試劑盒法:如Abbkine的LliKine™辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)試劑盒,提供了一種簡單快速的方案,將HRP直接偶聯(lián)到含有自由氨基的蛋白質(zhì)、多肽或其他配體上。

功能特性

  • 催化活性:HRP-SH保留了辣根過氧化物酶的催化能力,能夠催化多種底物的氧化反應(yīng),如在過氧化氫存在下,催化底物產(chǎn)生顏色變化或化學發(fā)光信號。

  • 反應(yīng)性基團:巰基作為反應(yīng)性基團,能夠與其他含有活性基團的分子發(fā)生反應(yīng),形成穩(wěn)定的共價結(jié)合。例如,巰基可以與馬來酰亞胺基團反應(yīng),用于標記抗體、蛋白質(zhì)或其他生物分子,實現(xiàn)信號放大和檢測。

應(yīng)用領(lǐng)域

  • 免疫檢測:在酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、免疫印跡(Western blot)、免疫組化等實驗中,HRP-SH可作為標記酶,與抗體結(jié)合,用于檢測抗原或抗體的存在和含量。

  • 生物傳感器:可用于構(gòu)建生物傳感器,通過與目標生物分子結(jié)合,產(chǎn)生可檢測的信號變化,用于檢測生物分子、藥物和環(huán)境污染物等。

  • 化學合成:巰基可以參與多種化學反應(yīng),如縮合反應(yīng)和還原反應(yīng),為藥物合成和材料科學提供多種合成路徑。

注意事項

  • 保存條件:HRP-SH應(yīng)在冷藏條件下(-20℃)保存,以保持其活性和穩(wěn)定性。

  • 使用前處理:使用前需根據(jù)具體實驗要求進行適當?shù)奶幚?,如溶解、稀釋等,并注意避免反?fù)凍融。

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