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HRP-CHO|辣根過(guò)氧化物酶-醛基的描述

2025-02-24 [77]

辣根過(guò)氧化物酶-醛基(HRP-CHO)是一種將醛基(-CHO)與辣根過(guò)氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)結(jié)合的化合物,以下是其詳細(xì)介紹:

結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

辣根過(guò)氧化物酶是一種含四個(gè)二硫鍵的單鏈多肽,由無(wú)色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結(jié)合而成的糖蛋白,含18%碳水化合物。醛基通過(guò)與HRP分子中的特定基團(tuán)反應(yīng)而結(jié)合,形成HRP-CHO復(fù)合物。

制備方法

  • 高碘酸鹽氧化法:將HRP溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中,加入高碘酸鈉溶液,在低溫下反應(yīng)一定時(shí)間,使HRP的糖基被氧化成醛基,然后通過(guò)透析或其他純化方法去除未反應(yīng)的高碘酸鈉和其他雜質(zhì),得到HRP-CHO。

  • 試劑盒法:如Abbkine的LliKine™辣根過(guò)氧化物酶(HRP)偶聯(lián)試劑盒,提供了一種簡(jiǎn)單快速的方案,將HRP直接偶聯(lián)到含有自由氨基的蛋白質(zhì)、多肽或其他配體上。

功能特性

  • 催化活性:HRP-CHO保留了辣根過(guò)氧化物酶的催化能力,能夠催化多種底物的氧化反應(yīng),如在過(guò)氧化氫存在下,催化底物產(chǎn)生顏色變化或化學(xué)發(fā)光信號(hào)。

  • 反應(yīng)性基團(tuán):醛基作為反應(yīng)性基團(tuán),能夠與氨基酸、蛋白質(zhì)或其他生物分子中的氨基發(fā)生反應(yīng),形成穩(wěn)定的共價(jià)結(jié)合,可用于標(biāo)記抗體、蛋白質(zhì)或其他生物分子,實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大和檢測(cè)。

應(yīng)用領(lǐng)域

  • 免疫檢測(cè):在酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、免疫印跡(Western blot)、免疫組化等實(shí)驗(yàn)中,HRP-CHO可作為標(biāo)記酶,與抗體結(jié)合,用于檢測(cè)抗原或抗體的存在和含量。

  • 生物傳感器:可用于構(gòu)建生物傳感器,通過(guò)與目標(biāo)生物分子結(jié)合,產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)變化,用于檢測(cè)生物分子、藥物和環(huán)境污染物等。

  • 化學(xué)合成:醛基可以參與多種化學(xué)反應(yīng),如縮合反應(yīng)和還原反應(yīng),為藥物合成和材料科學(xué)提供多種合成路徑。

注意事項(xiàng)

  • 保存條件:HRP-CHO應(yīng)在冷藏條件下(-20℃)保存,以保持其活性和穩(wěn)定性。

  • 使用前處理:使用前需根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚恚缛芙?、稀釋等,并注意避免反?fù)凍融。

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